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深圳科软KR仿手工甩干式全自动酶标洗板机之酶联免疫检测法的特点和检验过程

2014年02月13日 09:18:27 发布

步骤过程:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

       科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言,其最大特点是:1、不用人工拍板;2、不会堵针;3、故障低;4速度快。

       不吸液:删除吸液针等吸液系统,利用旋转和重力去液。

       无污染:水平放板,旋转向下甩液,保证最大程度去液。独特锅底状接液设计,极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。

       免拍板:微孔内无残留,洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。

       不堵孔:无吸液针,极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理,实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗,避免结晶堵塞。开关机自动维护,保证管路内畅通无阻。

       不撞针:注液针不移动,与微孔板保持足够距离,有效保护酶标板和孔内包被。

       可条洗:每块板可以任选条数进行清洗,节省洗液,保护环境。

       速度快:一次可洗16块板,KR306洗好6块板约4分钟。


酶联免疫吸附剂测定法,简称酶联免疫法,或者ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。

步骤过程:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

特点:就是简单快捷,测定敏感度高,利用核心点是抗原抗体的结合具有特异性。

   ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂: 

  ①固相的抗原或抗体 

  ②酶标记的抗原或抗体 

  ③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

    双抗体夹心法

这是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下: 
  (1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质
  (2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 
  (3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 
  (4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 
  根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。

 双位点一步法

     在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

在一步法测定中,应注意钩状效应(hookeffect),类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果

间接法测抗体 

     间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下: 
  (1)将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。 
  (2)加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去。 
  (3)加酶标抗抗体:与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体,可用酶标羊抗人IgG抗体。 
  (4)加底物显色:颜色深度代表标本中受检抗体的量。

本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

竞争法

     可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下: 
  (1)将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。

  (2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。 (3)加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原最多,故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多。

捕获法测IgM抗体 
  血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法,先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下: 
  (1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上,形成固相抗人IgM。洗涤。 
  (2)加入稀释的血清标本:保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。 
  (3)加入特异性抗原试剂:它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。 
  (4)加入针对特异性的酶标抗体:使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。

  (5)加底物显色:如有颜色显示,则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在,是为阳性反应。



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