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深圳科软KR仿手工甩干式离心式洗板机之膜载体的酶免疫测定

2014年01月29日 04:30:00 发布

免疫印迹法(immuno-blotting test,I B T )亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linkedimmunoelectro transfer blot,E I T B ) ,因与S outhern早先建立的检测核酸的印迹方法Southern blot相类似,亦被称为Western blot。免疫印迹法(见图1-11)分三个阶段进行。

       科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言,其最大特点是:1、不用人工拍板;2、不会堵针;3、故障低;4速度快。

       不吸液:删除吸液针等吸液系统,利用旋转和重力去液。

       无污染:水平放板,旋转向下甩液,保证最大程度去液。独特锅底状接液设计,极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。

       免拍板:微孔内无残留,洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。

       不堵孔:无吸液针,极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理,实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗,避免结晶堵塞。开关机自动维护,保证管路内畅通无阻。

       不撞针:注液针不移动,与微孔板保持足够距离,有效保护酶标板和孔内包被。

       可条洗:每块板可以任选条数进行清洗,节省洗液,保护环境。

       速度快:一次可洗16块板,KR306洗好6块板约4分钟。

(一)斑点-ELISA
     斑点-E LISA( d o t - E L I S A)的特点为:①以吸附蛋白质能力很强的硝酸纤维素膜为固相载体;②底物经酶反应后形成有色沉淀,使固相膜染色。在实验室中斑点- E L I S A可按下列方法进行:在硝酸纤维素膜上用铅笔划成4 m m X 4 m m 的小格,在每格中央点加抗原1 /JL〜2 fxL,成为一个小点。干燥后将每格剪下分别放入E L I S A板孔中,按E L I S A方法操作,最后加人能形成不溶性有色沉淀的底物,如在膜上出现染色斑点,即为阳性反应(见图1-10)。因硝酸纤维素膜吸附性能强,一般在包被后须再进行封闭。如将硝酸纤维素膜裁剪成膜条,并在同一张膜条上点有多种抗原,将整个膜条与同一份血清反应,则可同时获得对多种疾病的诊断结果。斑点- E L I S A的缺点是操作麻烦,特别是洗涤的操作很不方便。

     应用斑点- E L I S A的原理,通过特殊工艺已制备出各种试剂,供临床检验用。一般分三种类型:①将试剂膜粘贴在塑料条片,便于洗涤和观察。②将试剂膜封在小盒内,膜下垫吸水剂,洗涤液通过膜吸入盒内,此即斑点免疫渗滤试验。③将试剂膜固定在小杠框格中放人特殊的自动分析仪中检测,应用这一系统可做各种蛋白质、激素、药物和抗生素的定量测定。
(二)免疫印迹法
     免疫印迹法(immuno-blotting test,I B T )亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linkedimmunoelectro transfer blot,E I T B ) ,因与S outhern早先建立的检测核酸的印迹方法Southern blot相类似,亦被称为Western blot。免疫印迹法(见图1-11)分三个阶段进行。

     第一阶段为S D S -聚丙烯酰胺凝胶电泳(S D S - P A G E )。抗原等蛋白样品经S D S 处理后带阴电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带)。第二阶段为电转移。将在凝胶中巳经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上,选用低电压(100 V )和大电流(1 A 〜2 A ) ,通电45 mi n转移即可完成。此分阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。第三阶段为酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加人能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色。常用的H R P 底物为3,3'-二氨基联苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈蓝紫色)。阳性反应的条带清晰可辨,并可根据S D S - P A G E加人的分子量标准,确定各组分的分子量。本法综合了 S D S - P A G E 的高分辨力和E L I S A法的高特异性和敏感性,是一个有效的分析手段,不仅广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性,并可用于疾病的诊断。在艾滋病病毒感染中此法作为确诊试验。抗原经电泳转移到硝酸纤维素膜上后,将膜切成小条,配合酶标抗体及显色底物制成的试剂盒可方便地在实验室中供检测用。根据出现显色线条的位置可判断有无针对病毒的特异性抗体。

(三)重组免疫结合试验
       重组免疫结合试验(recombinant immunl binding assay,RIBA)是与免疫印迹法相似的方法,不同之处在于特异性抗原不通过电泳分离转印,而是直接分条加在固相膜上。R I B A巳用于血清抗H C V 抗体的测定和分析。H C V 抗原成分复杂,包括有特异性的非结构区抗原、结构区抗原、核心抗原和非特异性的G 抗原。在E L I S A 中一般使用混合抗原包被,检测到的血清抗体是综合性的。R I B A 将各种抗原成分以横线条式分别吸附在硝酸纤维素膜的膜条上,放于特制的长条凹槽反应盘中与标本(一抗)和酶标二抗温育和洗涤,最终加底物显色后,显色条带提示血清中存在有针对这一吸附抗原的特异性抗体。根据条带的粗细和显色深浅,还可粗略估计抗体效价。R I B A 十分适合于含复杂抗原成分的病原体抗体的分析,除抗H C V 外,也成功地用于抗H I V 抗体的测定。

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