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深圳科软KR仿手工甩干式全自动酶标洗板机之食品中的花生过敏原ELISA检测

2014年02月11日 02:15:00 发布

1996年,Y e u n g等公布了检测花生蛋白的E L I S A方法,Y e u n g等研发了一种竞争性的E L I S A,使用了一种可针对混合脱脂的、烘焙的、未加工的、变性的或者是剥开未加工花生的兔多抗抗体。这些变性的原始免疫抗体先经过4 °C ,60 m i n以及S D S和二硫代苏糖醇的处理。在E L I S A实验过程中,烘焙的花生被用于涂在平板上,这些平板将会保存2 4个月。
       科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言,其最大特点是:1、不用人工拍板;2、不会堵针;3、故障低;4速度快。

       不吸液:删除吸液针等吸液系统,利用旋转和重力去液。

       无污染:水平放板,旋转向下甩液,保证最大程度去液。独特锅底状接液设计,极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。

       免拍板:微孔内无残留,洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。

       不堵孔:无吸液针,极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理,实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗,避免结晶堵塞。开关机自动维护,保证管路内畅通无阻。

       不撞针:注液针不移动,与微孔板保持足够距离,有效保护酶标板和孔内包被。

       可条洗:每块板可以任选条数进行清洗,节省洗液,保护环境。

       速度快:一次可洗16块板,KR306洗好6块板约4分钟。

     花生是已知最能引起过敏症的食品,它所引起的过敏反应,轻微的可以是温和的风疹现象,严重的会引起对危及生命的过敏反应。过去,全世界人群中所有食品过敏症的流行评估率约为4 % ,其中美国的统计数据显示花生和树果的过敏症约为0.6% , 英国的统计数据约为0 . 4 8 %。但是在新近的报告中发现,1999〜2003年美国儿童对花生过敏症出现了翻倍的迹象。大多数的研究报告指出低量的花生蛋白足以导致过敏症患者出现花生过敏症,因此存在食品中痕量的花生就可能对有花生过敏症的消费个体带来危害,这就要求这些患者在进食的时候要小心避免摄人含有花生的食品,但是这种情况总是会不时的发生。花生果实中平均含有2 9 %蛋白,总蛋白中的2 0 %可以归属于过敏原Ara hi(似碗豆蛋白,分子量为63 K D 〜64 K D ),总蛋白中的1 0 %可以归属于其他过敏原A m h2(似蓝豆蛋白,分子量为17 K D )。
       Burks等人研究发现花生的主要过敏原在食品加工不易被除去,也难以消化。Koppelma n 等人表明烘烤对于Ara h i的致敏性没有什么影响,同时Malecki等人在其他研究中也发现烘烤会扩大Ara h i的致敏性。对于检测花生残留物的成功免疫检测方法而言,关键因素是找到一种源自动物性的抗体能区分烘烤和热处理花生,因为这两者是花生在食品中使用的最多消费形式。
        最先检测花生残留物的E L I S A检测方法是由Hefle于1994年提出,该方法使用单克隆抗体,针对分子量为14 K D 〜44 K D 的花生蛋白为捕获抗体,并以多克隆抗花生的兔抗体为检测器。该兔抗体是针对粗供烤花生提取物而培养成的。该方法能在大多数食品中检测< 4 0 m g / k g的花生含量。烘烤花生在香草冰淇淋中的含量为0 . 0 1 %〜5% ,同时使用E L I S A和皮肤点刺试验对7 名花生过敏症的对象进行检测,发现其中6 人,在最低检测( 0 . 0 1 % = 100 m g / k g )检测中的皮肤点刺试验反应比E L I S A更敏感。样品也同时用R A S T 抑制实验进行检测,分析E L I S A和R A S T 抑制实验结果,两者相对称性、相关性均很高CR = 0.95)。其后的其他研究在使用放大体系、改良抗体或者评估食品中的干扰因素等方面出发,改进E L I S A的敏感性,从而在1990年代中期,多种检测花生的E L I S A方法形成和发展起来。
         1996年,Y e u n g等公布了检测花生蛋白的E L I S A方法,Y e u n g等研发了一种竞争性的E L I S A,使用了一种可针对混合脱脂的、烘焙的、未加工的、变性的或者是剥开未加工花生的兔多抗抗体。这些变性的原始免疫抗体先经过4 °C ,60 m i n以及S D S和二硫代苏糖醇的处理。在E L I S A实验过程中,烘焙的花生被用于涂在平板上,这些平板将会保存2 4个月。
         Y u e n g等分别在穿刺食品样本2. 5 mg/kg,5 mg / k g、10 mg/kg,20 m g / k g ,观察穿刺结果回收率约为6 8 %〜9 0 %。实验结果显示测试样品在低的蛋白量(< 4 0 p g / m L)下没有交叉反应。他们发现所用的兔抗烘焙花生抗体可以在E L I S A实验中达到最有效的效果。他们分析了 1 5个无花生的巧克力棒和三种类型的芝麻饼干,没有发现花生残留物。该E L I S A方法据称能检测到400 jug/kg。Koppelman报告了一种使用针对从未加工花生中纯化Ara hi的兔多单隆抗体的夹心E L I S A方法。该夹心E L I S A方法利用相同的抗体作为检测器和捕捉器,部分抗体用辣根过氧化物标记后作为检测器抗体。在研究中发现在该E L I S A方法对油炸花生不起作用,但是该方法对于绝大数的豆类和其他检测食品没出现交叉反应。当杏仁和腰果的浓度在500 p g / m L时,结果会显示轻微的阳性信号,但是经过1 0倍稀释后*这种情况就不再出现了。该方法花生在各种食品样品中回收率为3 5 %〜70% 。实验调査发现2 5个无添加花生食品中,均未检测出花生残留物。该方法能检测未加工和烘焙的花生,检测低限在0. 1 mg/kg。随后,P o m e s等在2003年报告了针对Ara h i的单克隆抗体夹心E L I S A方法。在这个研究中,该方法并不总能在添加花生的巧克力样品中检测出A r a h l。
         但是无论怎样,该方法将A m h i含量的检测与商业检测的E L I S A联系起来了。研究者是将花生粉添加到巧克力粉中,但没有使用工业化的人工标准,所以抽提的真实效率不能真实体现。该研究认为从巧克力中抽提A m h i的最佳方式是:室温溶于含5% 脱脂牛奶的磷酸缓冲液2. 5 h。虽然这与食品工业用的快速检测需要仍有距离,但是可适用于其他地方。

 

 

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