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质粒构建会遇到哪些问题?该如何进行正确的质粒构建呢?

2013年12月27日 16:48:49 发布

质粒构建会遇到哪些问题?该如何进行正确的质粒构建呢?。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、质粒构建、最先进的蛋白表达、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:025-68037686

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比如说质粒含有两个标记基因抗青霉素也抗四环素,目的基因插入到抗四环素基因中。实验步骤:
1.在一个平板上加入青霉素,则生长起来的是导入质粒的菌落,但这些质粒有可能是空质粒,有可能是导入目的基因的质粒。
2.再拿六个平板,都加入四环素,分别在上一个平板上挑取单菌落,并分别图在六个平板上,不生长的对应菌落则是插入目的基因的质粒。
    是区分重组质粒与普通质粒吗?
如果是,最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交
另外还有种方法,当普通质粒上有两个或以上的标记基因,而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以
如:普通质粒,抗青霉素也抗四环素,但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因,那么,双抗的就是导入普通质粒,只抗青霉素而不抗四环素的导入的就是重组质粒,都不抗的没有导入质粒。

大侠这之后是不是就可以断定哪个是插入目的基因的菌落了?还用进一步断定吗?我看他们还有交公司测序的,什么作用?公司会给他们什么东西?测序图?什么样子?

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