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质粒构建为您展示最专业的提取技术,唯有巴傲得拥有业内最高技术

2013年12月06日 15:14:06 发布

质粒构建为您展示最专业的提取技术,唯有巴傲得拥有业内最高技术。巴傲得生物科技有限公司是专业从事专业IHC试剂盒、质粒构建图、最先进的蛋白表达、抗体定制供应商、proteinA产品。等生命科学研究的专业技术型企业。从事生物技术产品的开发及销售,致力于将巴傲得生物打造成中国乃至世界一流的生物技术产品供应商。咨询热线:025-68037686

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如果是需要把一个特定的基因片段扩增后,插入到载体上构建质粒,则要根据载体上多克隆位点带有的酶切位点,在自己的目标基因片段上下游都分别设计一段序列,并在设计的序列中引入载体上的酶切位点。这个时候设计出来,用于完成PCR扩增,并能够在目标序列上下游都引入酶切位点的两段序列就叫做质粒构建引物。这样扩增获得的目标片段两端就带有了酶切位点,经过酶切后,与同样经过酶切的载体就可以连到一起,形成环状,完成质粒的构建。

基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切点,就会使抗四环素基因失活。这时,含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素,但对四环素敏感。没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素,而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似,只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对)。

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